Методы исследования коагуляционного гемостаза
Приготовление АПТВ – реагента: концентрированный буфер трис НСl и концентрированную суспензию каолина количественно перенести из флаконов в мерный цилиндр и общий объем довести дистиллированной водой до 200 мл. В результате получают рабочую суспензию каолина. Для приготовления AЧТВ - реагента смешать в пробирке 0,1 мл раствора кефалина с 3,0 мл рабочей суспензии каолина.
Приготовление рабочего раствора хлорида кальция: в день исследования, в соответствии с потребностью, концентрированный раствор хлорида кальция развести дистиллированной водой в 20 раз (1 объем концентрированного раствора + 19 объемов воды).
Проведение анализа:
1. В кювету коагулометра внести 0,1 мл исследуемой плазмы и прогреть ее при +370С в течение 1 мин.
2. В кювету добавить 0,1 мл AЧТВ - peaгeнтa, имеющего комнатную температуру.
3. Через 3 мин к смеси добавить 0,1 мл рабочего раствора хлорида кальция и зарегистрировать время свертывания.
AЧТВ в нормальной плазме составляет 28-38 с.
Определение тромбинового времени (Тромбо – тест)
Принцип метода:
заключается в определении времени свертывания плазмы крови под влиянием тромбина стандартной активности.
Состав набора: тромбин (лиофильно высушенный, 6-8 ед NIH во фл.) - 4 фл.; контрольная плазма (лиофильно высушенная) - 1 фл.
Оборудование, материалы, реагенты:
коагулометр; пипетки вместимостью 0,1 - 1,0, 10,0 мл; вода дистиллированная;
Приготовление анализируемых образцов:
венозную кровь центрифугируют при 3000 – 4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. получают бедную тромбоцитами плазму.
Подготовка реагентов к работе:
Разведение тромбина: в один из флаконов с тромбином внести необходимое количество дистиллированной воды (см. таблицу) и растворить содержимое при комнатной температуре и легком покачивании в течение 2-3 мин.
Ориентировочные значения нормы тромбинового времени свертывания
|
Объем дистиллированной воды на флакон с тромбином, мл |
Время свертывания, сек., при коагулометрическом определении |
|
2,0 |
11-14 |
|
3,0 |
15-19 |
|
5,0 |
20-29 |
Разведение контрольной плазмы:
во флакон с контрольной плазмой внести 0,5 мл
дистиллированной воды и растворить содержимое при комнатной температуре и легком покачивании в течение 3 мин.
Проведение анализа:
1. В кювету коагулометра внести 0,1 мл контрольной плазмы и прогреть ее при +370С в течение 1 мин.
2. В ту же кювету добавить 0,1 мл раствора тромбина и зарегистрировать время свертывания.
Исследование плазмы больного выполняется аналогично.
Чтение результатов:
результат выражают в секундах, сравнивают время свертывания контрольной и исследуемой плазмы. В норме ТВ составляет 14 – 17 с.
Определения концентрации фибриногена (Квик – Фг – тест)
Принцип метода:
образовавшийся после свёртывания плазмы крови фибрин быстро высушивается и по его весу определяется содержание фибриногена в плазме.
Состав набора:
тромбопластин, 1 г – 2 фл.; хлорид кальция (концентрированный 20:1 раствор, 5,54%), 10 мл – 6 фл.; буфер трис – НСl (концентрированный 20:1 раствор, 1 М), 10 мл – 2 фл.